ساخت ناقل بیانی pFUM003 دارای خاصیت ترشح خارج سلولی

سابقه و هدف: پروبیوتیک‌‌ها میکروارگانیسم‌های مفیدی هستند که در طی قرن‌ها در بهبود مواد غذایی و هم‌چنین ارتقاء سلامت استفاده می‌شوند. امروزه پروبیوتیک‌های نوترکیب به‌عنوان وسیله انتقال برای بیان و انتقال هدفمند مولکول‌های بومی یا نوترکیب به سطوح مخاطی دستگاه گوارش در تغذیه و سلامت استفاده می‌شوند. لاکتوکوکوس لاکتیس یک کاندیدای بالقوه برای تولید پروتئین‌های زیستی مفید است. ازآن‌جا که برای این باکتری ناقل مناسبی که دارای توالی سیگنال برای ترشح خارج سلولی باشد وجود ندارد لذا هدف ما از این مطالعه افزایش راندمان بیان پروتئین‌های نوترکیب در خارج از سلول با استفاده از واردکردن توالی سیگنال پپتید usp45 به ناقل پلاسمیدی pBU003 است. مواد و روش‌ها: usp45 سیگنال پپتیدی دارای 81 باز است که در مطالعات زیادی به‌عنوان افزایش‌دهنده بیان نیز معرفی ‌شده است. در این مطالعه توالی سیگنال usp45 ساخته شد و سپس با استفاده از واکنش لیگاسیون به پلاسمید pBU003 انتقال یافت. پس از آن به باکتری اشریشیاکلی سویه MC1061 منتقل شد. پلاسمید نوترکیب به pFUM003 نام‌گذاری شد. یافته‌ها: تعیین توالی پلاسمید حاوی usp45 نشان داد که دارای ساختار پلاسمیدی و توالی سیگنال صحیح است و تطابق کامل با توالی‌های الگو (EU382094.1) گزارش شده در بانک ژنی NCBI دارد. نتیجه‌گیری: پلاسمید نوترکیب ساخته شده به pFUM003 نام‌گذاری شد. این پلاسمید نوترکیب به لحاظ ساختاری صحیح و جهت انتقال به پروبیوتیک‌ها مناسب می‌باشد